CAS号：

荧光定量PCR试剂盒（SYBR Green qPCR Mix）

货号：KRSJH003

* 产品仅供科研使用

CAS号：		产品编号：	KRSJH003
规格：	5x1mL	分子量：
货期：	现货	中文名：	荧光定量PCR试剂盒（SYBR Green qPCR Mix）
价格：	440元	英文名：
储存条件：	-20℃避光，一年有效；2～8℃储存6个月	分子式：

产品简介：

本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂,将热启动Taq DNA聚合酶、dNTP、SYBR Green I等试剂预混成即用的2x Mix，可对目标cDNA进行快速并具有高特异性的定量检测。本产品采用化学修饰的Hot Start Taq DNA聚合酶，在 50 ℃以下无活性，只有 95 ℃条件下加热后才能完全恢复酶的活力，最大限度减少非特异性扩增产物的产生，提高荧光定量PCR反应的精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。

使用说明：

一、配制 Real-Time PCR反应体系：

1、将所有试剂2×SYBR Green qPCR Mix，ROX Reference Dye，模板，引物和RNase-Free ddH2O，在室温下融解并彻底混匀，避免产生气泡。短暂离心后，置于冰上按照下表配制反应液。

参考下表配制反应体系：

组分	20μl体系	50μl体系	终浓度
SYBR Green qPCR Mix	10μl	25 μl	1×
Primer F (10 μM)*	0.4~0.8μl	1.5 μl	0.2~0.4 uM*
Primer R (10 μM)*	0.4~0.8μl	1.5 μl	0.2~0.4 uM*
50 x ROX Reference Dye**	——	——	——
cDNA模板	——	——	——
RNase-Free ddH2O	至20 μl	至50 μl	——

一般来说反应体系中引物终浓度为0.2 uM即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时，可以在终浓度0.2~0.4 uM范围内调整引物浓度。

几种常见仪器的最适ROX Reference Dye浓度见下表：

仪器型号	使用浓度
ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/StepOne/ StepOne Plus等	5×（20ul体系加2ul,50ul体系加5ul）
ABI 7500/7500 Fast、QuantStudio 6/7 Flex、ViiA 7、Stratagene Mx3000P/Mx3005P和Mx4000等	1×（20ul体系加0.4ul,50ul体系加1ul）
Roche、Bio-Rad、Eppendorf等	无需添加

2、盖上或密封反应管/PCR板，轻轻混匀。短暂离心，确保所有组分都在管/板底。

二、进行Real-Time PCR反应

1、建议采用两步法PCR反应程序进行反应。

两步法反应程序:

步骤	温度	持续时间	循环数
预变性	95℃	5min	1
变性	95℃	10sec	40
退火延伸数据采集	60℃	30sec	40
熔解曲线分析	根据仪器推荐程序设置

若模板量较低等因素导致扩增效果不佳，可使用三步法程序进行PCR反应。

三步法反应程序:

步骤	温度	持续时间	循环数
预变性	95℃	5min	1
变性	95℃	10sec	40
退火	50-60℃	30sec	40
延伸数据采集	72℃	30sec	40
熔解曲线分析	根据仪器推荐程序设置

2、上机检测：将反应体系置于荧光定量 PCR 仪中，运行程序收集数据并分析结果。

化学试剂 多快好省

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荧光定量PCR试剂盒（SYBR Green qPCR Mix）

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