产品简介：

DiO即DiOC18(3)是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现绿色荧光。DiO是一种亲脂性羰花青(carbocyanine)染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色，染色后非常稳定。DiO毒性很低，通常不会影响细胞的生存力。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiO被激发后可以发出绿色的荧光，DiO和磷酯双层膜结合后最大激发波长为484nm，最大发射波长为501nm。

本试剂盒可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。DiO对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI，有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。

本试剂盒应用96孔板每孔检测体系的体积为100μl时可以进行500次检测。

使用方法（仅供参考）：

一、工作液的配制：

取1ul DiO染色液用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）1ml稀释，配制成工作液。

注：细胞膜染色工作液的用量：对于6、12、24、96孔板，每孔的细胞膜染色工作液分别为1~2ml、0.5~1ml、300~500μl和50~100μl；对于切片，可以根据切片大小，每个切片使用100-200μl的细胞膜染色工作液。

二、贴壁细胞的染色：

1．将贴壁细胞种于细胞培养皿、多孔细胞培养板或者细胞爬片上。

2．吸除培养液，缓冲液清洗2-3次。

3．加入适当体积的DiO染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4．37℃孵育2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以2min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

5．吸除DiO染色工作液，用培养基清洗2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。

6．荧光显微镜下观察。

三、悬浮细胞的染色：

1．加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1-2×106/mL。

2．37℃孵育细胞2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以2 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

3．孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。

4．吸除上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5．重复3，4步骤两次以上。

6．将细胞转移至多孔板、细胞培养皿或者细胞爬片上，在荧光显微镜下观察。

注意事项：

1、如果染色时间过长或染色后细胞继续培养，探针也可能进入细胞内而染色其它细胞器的膜。

2、本产品体积较小，每次使用前需先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。

3、荧光染料不可避免的都存在一定的淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

4、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。